大白菜自交不亲和基因的利用

蕾期自花授粉试验结果表明大白菜(Brassica campestris L. ssp.Pekinesis (Lour) Olsson)品系40-9所结种子最多,达0.165 g/株.利用种子结实分析方法和荧光显微镜技术对9个大白菜品系进行自交不亲和性测定,试验采取完全随机设计.用种子结实分析方法测定时,2个品系 27-3-7和40-9表现为自交不亲和系.用荧光显微镜技术测定时,品系23-3-4,27,27-3-7,40-9和142发现为弱性自交不亲和.用4个具有自交不亲和性的自交系进行正反交生产种子(由蜜蜂授粉),结果表明,40-9做母本结籽最多,这是因为母体效应.组合40-9×142-5, 40-9×27-3-7 和40-9×23-3-4结籽较多,分别为30.16,24.63和16.96 kg/ hm2.1998年在泰国清迈大学对11个大白菜杂一代品种和3个商用品种进行比较试验,一代组合142-5×40-9结球产量最高,达38 563 kg/ hm2,高于商用品种的36.3 %.其他组合如23×27, 23×142, 27-3-7×23-3-4, 27-3-7×142-5和40-9×23-3-4也表现较好的园艺性状,产量分别为29038,34694,22906,32188和23 656 kg/ hm2.但由于结球形状稍圆,市场销售尚不理想.     

福建黄牛的遗传多态性及分类

用8个微卫星标记对福建黄牛的等位基因频率、多态信息含量(PIC)、遗传杂合度(H)和有效等位基因数(E)等指标进行统计分析,并在此基础上对其进行聚类分析和分类研究.结果表明:(1)8个微卫星标记在所检测的福建黄牛群体中都表现出较丰富的多态性,4个群体8个微卫星座位共有58个等位基因,每个微卫星标记平均检测到7.2个等位基因(3-11);8个微卫星标记的PIC平均为0.6471(0.3942-0.8062),各群体的PIC差异不显著;全部群体的H为0.2930;各群体的E平均为3.37(3.03-3.84).这显示黄牛群体的等位基因频率、PIC、H和E等指标有较好的一致性,说明福建黄牛品种内在微卫星位点上均具有丰富的遗传多样性.(2)根据Ne i氏标准遗传距离进行UPGMA聚类分析的结果显示,4个群体间的遗传变异不大.福建黄牛地方品种在微卫星位点上具有丰富的遗传多样性;遗传距离及聚类分析结果表明,这些群体黄牛属于同一个地方品种.     

长江三角洲白山羊群体遗传多样性分析

以结构基因座和微卫星标记检测长江三角洲白山羊群体的遗传多样性。结果表明,9个结构基因座上的平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数分别为0.176 7、0.145 7和1.283 7;7个微卫星座位的平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数分别为0.886 7、0.877 4和11.290 7。微卫星标记揭示的群体遗传多样性高于结构基因座。     

7个绵羊微卫星DNA标记在绵(山)羊群体中的多态性检测

选择分别位于绵羊2,4,6,9,17和19号染色体上的7个微卫星标记OarFCB11,OarFCB128,MAF70,OarAE101,MAF33,OarFCB48和OarFCB304,对湖羊、同羊及长江三角洲白山羊的典型群随机样本相应位点进行了PCR检测。结果表明,每个微卫星座位发现7个以上等位基因,且均存在多态;湖羊、同羊、长江三角洲白山羊群体杂合度(H)分别为0.9092,0.9177和0.8867,相应的群体基因平均多态信息含量(PIC)分别为0.9024,0.9116和0.8774,有效等位基因数(Ne)分别为11.7723,12.4538和11.6104,均以同羊为最高;以产生有效条带为标志,随机样本的PCR扩增效率存在明显的群体间和座位间差异,以长江三角洲白山羊和OarFCB128座位为最高;以7个座位微卫星等位基因频率推算群体间标准遗传距离,山羊与绵羊群体间遗传距离远大于绵羊群体之间,湖羊、同羊间亲缘距离系数R为0.1998。研究结果提示:选择的7个微卫星DNA座位均为多态座位;以7个微卫星标记为测度,湖羊、同羊及长江三角洲白山羊具有丰富的遗传多态性;7个微卫星标记可进一步用于绵山羊近缘种间遗传分析研究。     

1株禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其实时荧光定量PCR检测方法的建立

自禽传染性支气管炎病毒流行较严重地区的患鸡组织病料中分离得到1株疑似毒株,利用鸡胚培养、气管环及动物回归试验、电镜观察、RT-PCR等多种方法及对其S1基因序列进行比较分析,确定该分离毒株为禽传染性支气管炎病毒QX型。同时针对该新分离的传染性支气管炎病毒建立了实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:针对该分离毒株的S1基因区设计1对引物和TaqMan探针,制备质粒标准品,建立标准曲线,其线性关系为y=-3.385 7x+42.235,R^2=0.999,扩增效率为97.5%,该法能区分常见禽类流行病毒,检测灵敏度可达42.1拷贝数/μL,比普通PCR检测限度高,重复性良好,因而该实时荧光定量PCR检测方法可靠。本试验同时进行了拷贝数与半数鸡胚感染量(EID50)对应关系研究,证明了在控制病毒代次、冻融次数等条件下,建立线性关系为y=0.249 2x+1.341×10^6(以拷贝数为x轴,EID50为y轴),R^2=0.956 4,可实现拷贝数替代EID50。     

携带绿色荧光蛋白基因重组猫泛白细胞减少症病毒的拯救

本研究旨在构建携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的重组猫泛白细胞减少症病毒（feline panleukopenia virus,FPV）,以便更快速有效的检测中和抗体。参照GenBank中GFP基因序列设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得携带AgeⅠ和NheⅠ酶切位点的GFP基因,并对pFPV质粒进行定点突变,从而获得AgeⅠ和Nhe Ⅰ酶切位点,然后用AgeⅠ和Nhe Ⅰ同时双酶切pFPV和GFP基因,经4 ℃过夜连接、转化,成功构建携带GFP基因的重组猫泛白细胞减少症病毒质粒pFPV-GFP,应用脂质体转染法将重组质粒pFPV-GFP导入猫肾细胞（F81）,利用GFP独特的发光机制可在荧光显微镜下对标记的重组病毒rFPV-GFP进行细胞内活体观察,利用Western blotting鉴定重组病毒rFPV-GFP中GFP的表达情况。结果显示,重组质粒pFPV-GFP转染F81细胞24 h时可观察到绿色荧光蛋白,且随着转染时间的延长观察到的绿色荧光蛋白数量增多,说明重组质粒pFPV-GFP成功转染到F81细胞中,Western blotting鉴定出GFP在重组病毒rFPV-GFP中稳定表达。本研究通过在pFPV上成功插入GFP并拯救出病毒,说明pFPV上可以插入外源基因,为其他外源基因在pFPV上的插入奠定基础,同时GFP的插入为FPV的研究提供了更加有利的研究工具,为FPV的基础研究以及中和抗体的快速检测奠定基础。     

Taxonomic status of Chinese blue sheep (Pseudois nayaur): new evidence of a distinct subspecies

The blue sheep is an endemic species to the Qinghai‐Tibet Plateau and surrounding regions. It has been regarded as having 2 subspecies: Pseudois nayaur nayaur and P. n. szechuanensis. However, such a classification remains controversial. Herein, we analyze 10 microsatellite loci and part of the mitochondrial control region for clarification in such taxonomic debates. We use samples from 168 individuals from 6 geographic populations covering almost all the distribution areas of the species in China to carry out comparisons. Phylogenetic trees derived from both the microsatellite and mitochondrial markers combined with the discriminant analysis of principal components (DAPC) and the STRUCTURE analysis reveal that the individuals in the Helan Mountains are well grouped with a distinct evolutionary lineage and are significantly different from the other populations of P. n. szechuanensis according to Fst values, implying that this isolated population should be categorized as a valid subspecies; namely, Pseudois nayaur alashanicus. The isolation‐by‐distance (IBD) analysis shows a significant positive relationship between genetic and geographical distances among the populations.     

萝卜自交不亲和基因的利用

利用荧光显微镜技术和种子结实分析方法对7个中国型萝卜(Raphanus sativus L. var.longipinnatus Bailey)自交系进行研究其自交不亲和水平.试验结果表明多数自交系为自交不亲和.采取完全杂交组合方法进行筛选.从品种比较和结实情况看,杂一代27-1-3×18-1, 27-1-3×18-2, 27-1-3×18-3和27-1-3×18-6 以及部分77-2×18-11 和77-4×18-7有较好的园艺性状,如整齐度、叶色深绿无毛、肉质根呈圆筒状、根皮光滑、根质紧实、根重360～400 g,这些性状符合市场要求.前期试验结果表明,这些杂一代的根产量都明显高于普通品种,但还有待在农户的地里做进一步的试验.     

荧光特征分子表征冷鲜羊肉新鲜度

为明确羊肉中荧光物质与新鲜度指标的关系,筛选能够表征羊肉新鲜度的荧光特征标志物,以羊背最长肌为研究对象,在0 ℃条件下,测定羊肉中潜在荧光标志物酪氨酸（Tyrosine,Tyr）、核黄素（Riboflavin,VB2）、三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate,ATP）、色氨酸（Tryptophan,Trp）、烟酰胺腺嘌呤二苷酸（Nicotinamide Adenine Dicylate,NADH）、原卟啉（Protoporphyrin,PPIX）的含量,研究其与挥发性盐基氮（Volatile Base Nitrogen,TVB-N）、硫代巴比妥酸值（Thiobarbituric Acid Value,TBARS）、菌落总数（Total Colony Count,TVC）的关系。结果表明：在贮藏期间羊肉发生酸败,肉色劣变,当TVB-N超过15 mg/100 g,羊肉在17 d时已腐败,其中TVB-N、TBARS、TVC与Tyr、Trp、PPIX均呈显著上升趋势,而NADH、ATP均呈下降趋势,VB2在贮藏期间呈现先上升后下降趋势;通过相关性分析,证实ATP、NADH、Tyr、Trp、PPIX与TVB-N、TBARS、TVC具有显著相关性（P<0.05）,相关系数在0.60～0.88范围内;并在4 ℃贮藏条件验证各荧光物质变化规律,发现各物质变化规律与0 ℃一致,后续以ATP、NADH、Tyr、Trp、PPIX指标进行逐步回归分析发现,基于Tyr和Trp构建的TVB-N和TBARS回归表征模型效果较好,决定系数分别为0.926、0.878,基于Tyr和NADH构建的TVC回归模型效果较好,决定系数为0.952。研究确证了NADH、Tyr、Trp可以作为羊肉新鲜度表征指标,并构建了TVB-N、TBARS和TVC预测表征模型,为后续开发基于荧光特征标志物的羊肉新鲜度快速检测技术提供了理论支撑。     

向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立

向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物。为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法。通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌。荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg。由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测。